一、羊驼免疫


以“三聚体Spike蛋白”作为抗原进行免疫

 

免疫流程共计46天

 

稀释比例 免疫后血清 免疫前血清
 500 1.684 1.694 1.716 0.105 0.142 0.08
1500 1.508 1.538 1.581 0.072 0.085 0.083
4500 1.186 1.178 1.231 0.107 0.093 0.056
13500 0.75 0.741 0.747 0.095 0.087 0.064
40500 0.322 0.312 0.353 0.088 0.057 0.065
121500 0.13 0.133 0.138 0.074 0.074 0.051
364500 0.071 0.075 0.085 0.067 0.063 0.056
1093500 0.071 0.08 0.075 0.063 0.071 0.088

 

 

二、建立噬菌体展示文库

文库序列多样性：5.2×108 cfu

 

VHH插入率：100 %

 

 二、噬菌体表面展示筛选与鉴定阳性单克隆纳米抗体表达微生物

 

  • 共挑选鉴定约400个单克隆微生物
  • lELISA鉴定阳性率约为50%
  Sanger测序

 

得到约150株单克隆纳米抗体

 

 

 

四、阳性单克隆纳米抗体重组表达、纯化与测试

 
 
 
 
 

产量约1-10 mg纳米抗体/L细菌

 

4 4

 

 五、抗体结合表位鉴定

表位

数量

NTD

23株

RBD

42株

NTD & RBD

15株

S2 subunit

17株

未知

17株

合计

114株

 

六、中和抗体检测

共获得8株新冠中和抗体

6 2

野生型

6 3

南非突变株