蛋白免疫

传统蛋白免疫是抗体开发经典成熟的主流技术路线,依托体外纯化获得的高纯度天然 / 重组抗原免疫实验动物,可充分刺激机体免疫系统激活体液免疫应答,诱导产生靶向特异性多克隆、单克隆及纳米抗体,具备技术体系完善、免疫应答稳定、抗原表位贴合天然构象、抗体特异性强等核心优势,适配绝大多数可溶性胞外蛋白、膜蛋白胞外段、多肽抗原等靶点开发需求。

可溶性蛋白免疫:

针对游离配体、单跨膜蛋白胞外区(ECD)等可溶性抗原开展免疫,抗原空间构象稳定、制备质控简便,可高效刺激动物免疫系统,诱导机体产生靶向特异性免疫应答,最终筛选获得 IgG 全分子抗体或结构更小、组织穿透性更优的纳米抗体,是科研工具抗、诊断抗体开发的通用方案。

膜蛋白免疫:

膜蛋白包含单次跨膜螺旋、多次跨膜螺旋、β- 桶孔蛋白、单栖两亲螺旋、脂蛋白、外周膜蛋白等多种复杂结构,天然镶嵌于磷脂双分子层,疏水跨膜区极易失活,常规重组蛋白制备难以完整保留天然构象。纳博生命针对各类整合膜蛋白、外周膜蛋白、脂蛋白建立专属免疫工艺,可最大程度维持膜蛋白完整天然三维结构,完整呈现胞外、跨膜结构域真实抗原表位,有效规避抗原变性导致的无效免疫、低特异性克隆富集问题,助力筛选靶向膜蛋白靶点的功能性纳米抗体,适配 GPCR、离子通道、病毒膜蛋白等难成药靶点抗体研发。


根据靶点分析选择蛋白抗原进行免疫,免疫流程如下:

序号

时间

免疫操作流程

1

Day 0

免疫前采血收集阴性血清。

2

Day 1

首免:0.5 mg 蛋白免疫原+完全弗氏佐剂;分10个位点皮下注射。

3

Day 14

2免:0.25 mg 蛋白免疫原+不完全弗氏佐剂;分5个位点皮下注射。

4

Day 21

收集1mL全血,分离血清,用多肽做ELISA滴度检测。

5

Day 28

3免:0.25 mg 蛋白免疫原+不完全弗氏佐剂;分5个位点皮下注射。

6

Day 35

收集1mL全血,分离血清,用多肽做ELISA滴度检测。

7

Day42

4免:0.25 mg 蛋白免疫原+不完全弗氏佐剂;分5个位点皮下注射。

8

Day 49

采集10 mL全血,分离血清后开展蛋白ELISA效价检测。根据效价检测结果执行以下操作:

  • 采集50 mL全血,分离血清并再次进行多肽ELISA效价检测;
  • 取剩余全血分离外周血单个核细胞(PBMC),取2.0×10⁷个细胞加入1 mL TRIzol试剂裂解,按每管1 mL进行分装冻存。

分析结果:


交付内容: