细胞免疫

细胞免疫,指以完整活细胞、固定细胞、细胞裂解物、细胞膜组分等完整细胞类材料作为免疫原,直接免疫实验动物,刺激机体免疫系统产生针对细胞表面抗原、胞内蛋白、细胞特异性标志物的多克隆 / 单克隆抗体的免疫技术。

细胞抗原免疫是直接采用完整细胞、细胞裂解物或细胞膜组分作为天然完全抗原免疫动物,进而制备靶向细胞标志物抗体的技术。细胞与小分子半抗原不同:细胞本身含有大量天然蛋白、糖蛋白、脂多糖等多种免疫原性表位,自带 T 细胞、B 细胞识别位点,无需偶联载体蛋白,属于天然完全抗原。免疫后动物体内会同时产生多种抗体,分别靶向细胞膜受体、分化抗原、胞内骨架蛋白、肿瘤特异性抗原等不同细胞组分。
该方法最大优势是保留抗原天然空间构象,易于获得适用于流式、免疫荧光的功能性抗体,且省去蛋白纯化、半抗原偶联步骤;缺点是免疫后杂抗体多、背景干扰大,低丰度细胞靶点难以获得高特异性抗体,多用于细胞表面标志物、肿瘤细胞、免疫细胞相关抗体的筛选与开发。

常见细胞抗原类型:肿瘤细胞、免疫细胞(T/B 细胞、巨噬细胞)、干细胞、病原微生物细胞(细菌、真菌)、工程改造稳转细胞等。

免疫流程:

序号 时间 免疫操作流程
1 Day 0 免疫前采血收集阴性血清。
2 Day 1
首免:1E8 细胞免疫原+完全弗氏佐剂;分10个位点肌肉注射。
3 Day 14
2免:1E8 细胞免疫原+不完全弗氏佐剂;分5个位点肌肉注射。
4 Day 21
收集1mL全血,分离血清,用多肽做ELISA滴度检测。
5 Day 28
3免:1E8 细胞免疫原+不完全弗氏佐剂;分5个位点肌肉注射。
6 Day 35
收集1mL全血,分离血清,用多肽做ELISA滴度检测。
7 Day 42
4免:1E8 细胞免疫原+不完全弗氏佐剂;分5个位点肌肉注射。
8 Day 49

采集10 mL全血,分离血清后开展细胞ELISA效价检测。根据效价检测结果执行以下操作:

  • 采集50 mL全血,分离血清并再次进行多肽ELISA效价检测;
  • 取剩余全血分离外周血单个核细胞(PBMC),取2.0×10⁷个细胞加入1 mL TRIzol试剂裂解,按每管1 mL进行分装冻存。

结果分析:

交付内容: